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數顯電動離心機2種分離的方法

更新日期:2016-09-26      瀏覽次數:1886
   數顯電動離心機是通過一定速度的旋轉產生離心力,從而使離心管中的液態試驗物在離心力的作用下根據其顆粒和質量的大小產生分離沉淀,達到試驗目的。微電腦控制離心轉速和定時時間,轉速自動穩定,定時。數顯電動離心機屬常規實驗室用離心機,是生物、化學、醫藥等科研教育與生產部門的生化儀器,其zui高轉速4000轉/分,用于放射免疫鑒定及分離細胞的大質點等。
  數顯電動離心機分離方法不一,適用場合也不盡相同。目前zui主流的離心分離方法主要是差速離心法和區帶離心法,其實在數顯電動離心技術制備超離心法一文中有提及兩種離心方法,今天筆者對這兩種方法的原理及應用介紹進行補充和完善。
  1. 差速離心法:許多具有生物活性的生物大分子和亞細胞器是不穩定的,需要低溫高速離心,zui常用的是差速離心法。通過離心后倒出上清液和沉淀分開,把分離出來的上清液再增大轉速離心,分離出第二部分沉淀,這樣不斷增大轉速,逐級分離出所需要的物質。利用這種方法可以有效地分離大小上差別較大的顆粒,但不能分離大小相似的顆粒,而且所分離出來的組分往往是不均一的,雜有其他種類的顆粒。
  2.區帶離心法:其中又可以分為兩種:速率區帶離心和等密度速率區帶離心。
  1)速率區帶離心法:這是將小量懸液放在一平緩的密度梯度液上,用此梯度液來穩定顆粒的沉降。由于離心,顆粒離開起始區帶而移動,移動的速度是由顆粒的大小、形狀和它們所受數顯電動離心機的離心力來決定的。離心一段時間歷,各種穎粒將按照它們的相對速度移動而各個分開,成為一系列區帶。用這種方法我們可以將沉降速度差為20%或者更大的顆粒。
  2)等密度區帶離心法:這是將要分離的顆粒懸液放密度梯度液上,或者實際上將顆粒溶于制作梯度的溶液中。通過離心,顆?;蛘呱细』蛘呦鲁?,達到與它們自己密度相同的液體處在這里它們沒有重量,不管離心多長時間,它們再也不移動了。這些顆??沙蔀橐幌盗袇^帶,每種顆粒在它自己的密度區。所以,這是一種利用顆粒浮密度的大小分離顆粒大小的方法。使用的介質通常是氯化銫(Cscl)和硫酸銫(Cs2SO4)。前者適合于DNA分離,后者適合于RNA分離。這種方法與速率區帶離心法相比,它有一個主要的缺點是在離心期間,顆粒不可避免地暴露在高濃度的梯度溶液中,會引起顆粒的部分損傷,并可能出現相當于損傷顆粒的一些額外的區帶。
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